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            液相色譜儀工作原理

            時間:2017-07-19 16:50:00    來源:    閱讀次數:

            液相色譜儀是一種常用的色譜儀產品im竞猜,是利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異,對混合物進行先分離,而后分析鑒定的儀器。液相色譜儀的工作原理是什么呢?
            液相色譜儀的工作原理
            系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱im竞猜、檢測器im竞猜、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相im竞猜,被流動相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動時im竞猜,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來高效液相色譜儀主要有進樣系統im竞猜、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統,下面將分別敘述其各自的組成與特點。
            進樣系統
            一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作,進樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的。
            輸液系統
            該系統包括高壓泵im竞猜、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為l.47~4.4X10Pa,流速可調且穩定,當高壓流動相通過層析柱時,可降低樣品在柱中的擴散效應,可加快其在柱中的移動速度,這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動相貯存器和梯度儀,可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變im竞猜,包括改變洗脫液的極性im竞猜、離子強度im竞猜、PH值im竞猜,或改用競爭性抑制劑或變性劑等im竞猜。這就可使各種物質(即使僅有一個基團的差別或是同分異構體)都能獲得有效分離。
            分離系統
            該系統包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長度為10~50cm(需要兩根連用時,可在二者之間加一連接管),內徑為2~5mmim竞猜,由"優質不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成,住內裝有直徑為5~10μm粒度的固定相(由基質和固定液構成).固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或硅膠構成,它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去)im竞猜、多孔性(孔徑可達1000?)和比表面積大的特點,加之其表面經過機械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣),或者用化學法偶聯各種基因(如磷酸基im竞猜、季胺基im竞猜、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等)或配體的有機化合物。因此,這類固定相對結構不同的物質有良好的選擇性im竞猜。例如im竞猜,在多孔性硅膠表面偶聯豌豆凝集素(PSA)后,就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來。
            另外,固定相基質粒小,柱床極易達到均勻、致密狀態im竞猜,極易降低渦流擴散效應?;|粒度小,微孔淺,樣品在微孔區內傳質短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據柱效理論分析im竞猜,基質粒度小,塔板理論數N就越大。這也進一步證明基質粒度小,會提高分辨率的道理。
            再者,高效液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調到60C,通過改善傳質速度,縮短分析時間,就可增加層析柱的效率。

             

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